G810 是现有临床研究中，选择性 RET 抑制剂治疗后最常检出的 RET 靶点内获得性耐药位点。[2,3] 针对其中的 G810S 和 G810C，Subbiah 等的同模型细胞研究发现：塞普替尼的抑制活性受G810突变影响更为明显，而普拉替尼受该位点突变的影响程度更低，药物活性下降幅度更小。换言之，G810S/C突变更容易削弱塞普替尼的抑制作用，而普拉替尼对这类常见突变表现出相对更高的耐受性。[1]
RET 靶点内获得性耐药，是指治疗过程中 RET 本身出现影响药物作用的改变。[1,3]
2026 年发表于《Clinical Cancer Research》的 RETgistry 全球协作研究，纳入 109 名患者、143 份选择性 RET 抑制剂治疗进展后的组织或血浆活检样本。其中，肺癌患者贡献的 121 份样本中，15 份检出 RET 靶点内耐药突变。[3]
这 15 份样本中，11 份为单独的 G810 错义突变，1 份同时检出 G810S 与 V804M，1 份检出多种 G810 突变，1 份存在同时影响 V804 和 G810 的插入缺失改变，另 1 份为单独的 V804M。[3]
2024 年 ESMO 公布的 LIBRETTO-001 耐药分析纳入 71 例接受塞普替尼后曾获临床获益、随后进展，且具有合格基线及进展时血液样本的 RET 融合阳性非小细胞肺癌患者；其中，8 例检出 G810C/S/R，占可分析进展患者的约 11%，也占全部 9 例 RET 靶点内耐药患者中的 8 例。[2]
Subbiah 等在 2021 年《Annals of Oncology》发表的这项研究中，对两名接受塞普替尼后先获益、后进展的患者进行了血液游离 DNA 分析，追踪治疗过程中出现的 RET 改变。这两名患者分别患有 RET M918T 突变的甲状腺髓样癌和 CCDC6-RET 融合的肺腺癌。[1]
在甲状腺髓样癌患者的血液中，研究者先后检出了 G810C/S、Y806C/N 等改变；在肺腺癌患者于塞普替尼治疗第 18 个周期出现进展时，检出了 G810C。同一篇论文还通过耐药细胞筛选和两药敏感性测试，检验这些 RET 改变对塞普替尼及普拉替尼抑制活性的影响。[1]
研究采用表达 KIF5B-RET 的 BaF3 细胞开展耐药筛选，通过突变库和持续药物筛选等方法，获得能够在塞普替尼作用下继续生长的细胞，再测序识别其 RET 改变。[1]
最终，39 株耐药细胞系中发现了分布在三个位置的五类突变：V738A、Y806C、Y806N、G810S 和 G810C。其中四类也出现在上述患者的血液检测中，分别是 G810C/S 和 Y806C/N。[1]
研究者进一步把这些突变细胞同时用于普拉替尼和塞普替尼的药物敏感性测试，并增加了 G810R 的检测。两药使用同一细胞背景、同一突变类型和相应实验条件，比较的是达到同等生长抑制程度所需的浓度。[1]
这种设计把比较集中在药物对特定突变细胞的作用上，减少了不同细胞背景、不同突变构成所带来的干扰。
研究者还通过免疫印迹检测 RET 磷酸化和细胞凋亡相关蛋白。RET 磷酸化反映激酶的活化状态，凋亡相关蛋白变化则提供细胞死亡过程的信息。实验显示，这些突变使两药抑制 RET 激酶活性和诱导细胞凋亡的作用减弱，与细胞生长实验观察到的耐药表现一致。[1]
研究用半数抑制浓度 IC₅₀ 衡量细胞生长抑制活性，即达到 50% 生长抑制所需的药物浓度。[1]
KIF5B-RET 细胞模型 | 普拉替尼 IC₅₀（nM） | 塞普替尼 IC₅₀（nM） |
未引入上述耐药突变 | 9.2 | 8.2 |
G810S | 390.6 | 880.2 |
G810C | 641.7 | 1227 |
G810R | 2650 | 2744 |
数据来源：原研究表 1，列示 IC₅₀ 均值；nM 为纳摩尔/升。[1]
G810S 模型中，普拉替尼达到 50% 生长抑制所需的浓度约为塞普替尼的 44%；G810C 模型中约为 52%。[1]
未引入耐药突变时，两药 IC₅₀ 分别为 9.2 和 8.2 nM，数值接近；引入 G810S 后，普拉替尼和塞普替尼的 IC₅₀ 分别升至各自原来的约 42 倍和 107 倍；引入 G810C 后，分别升至约 70 倍和 150 倍。[1]
倍数越大，突变使药物达到相同抑制水平所需的浓度增加得越多；普拉替尼的倍数较小，表示其体外抑制活性受到 G810S/C 的削弱较轻。[1]
G810R 使两药 IC₅₀ 都达到约 2700 nM；只有在临床报道极少的，不常见的Y806C/N 模型中塞普替尼的 IC₅₀ 才会略低。[1] RETgistry 研究在 143 份选择性 RET 抑制剂治疗进展后的活检样本中，报告的 RET 靶点内耐药突变以 G810 为主，未报告 Y806 位点突变。[1,3]
G810 表示 RET 蛋白第 810 位的甘氨酸，G810S、G810C、G810R 分别表示该位置被丝氨酸、半胱氨酸或精氨酸替换。这个位置位于药物结合口袋的溶剂前沿，换入体积更大的侧链后，会挤占药物结合所需的空间，形成空间位阻。[1]
研究者利用 X 射线晶体学解析了 RET 分别与两药结合的结构。结构显示，普拉替尼和塞普替尼均采用绕过 V804 门控区域、进入结合口袋后部的结合方式，因此对门控位点改变的适应能力与早期部分多靶点抑制剂不同；G810、Y806 等位点仍处在会影响药物结合的位置。[1]
1. Subbiah V, Shen T, Terzyan SS, et al. Structural basis of acquired resistance to selpercatinib and pralsetinib mediated by non-gatekeeper RET mutations. Annals of Oncology. 2021;32(2):261–268. DOI：10.1016/j.annonc.2020.10.599。公开全文及表 1、图 1—4。
2. Solomon BJ, Drilon A, Wirth LJ, et al. Mechanisms of Resistance to Selpercatinib in RET-Activated NSCLC and MTC from the LIBRETTO-001 Trial. ESMO 2024, Abstract 1293P. 会议海报，数据截止 2023 年 1 月 13 日。原始海报及配套幻灯。
3. Waliany S, Cooper AJ, Liu SV, et al. Landscape of Genomic Mechanisms of Resistance to Selective RET Inhibitors in RET-Altered Solid Tumors: Analysis of the RETgistry Global Consortium. Clinical Cancer Research. 2026;32(6):1157–1168. DOI：10.1158/1078-0432.CCR-25-4382。公开全文：On-Target RET Mutations、图 2 及 Discussion。